Analysis of RNA-Dependent RNA Polymerase Sequence of Infectious Flacherie Virus Isolated in China and Its Expression in BmN Cells

Full gene sequence of RNA-dependent RNA polymerase （RdRp） from Bombyx mori infectious flacherie virus isolated in Zhejiang Province, China （Zhejiang01/CHN/2002） was cloned. The sequence was 1 920 nucleotides in length coding 639 amino acid residues. Sequences comparison of RdRp showed Zhejiang01/CHN/2002 was 99.7% nucleotide sequence and 99.1% amino acids sequence homology with Japanese strain. The RdRp sequence was aligned with 8 representative picorna（-like） viruses and 8 highly conserved regions were detected. The result indicated their relevance function. Phylogenetic tree of 14 picorna（-like） viruses which RdRp presumed protein sequences revealed that the viruses from Iflavirus genus formed an independent clade. The RdRp was successfully expressed in BmN cells using Bac-to-Bac expression system.     

蕨麻猪白细胞抗原Ⅰ类分子3基因的克隆和序列分析

参照GenBank上登录的猪SLA-3基因序列(GenBank登录号:AF464010)设计1对引物,从经ConA刺激的蕨麻猪外周血液淋巴细胞中提取RNA,进行克隆、测序以及同源性分析和蛋白结构预测分析.结果表明:克隆的蕨麻猪SLA-3基因大小为1 086 bp,含一个完整的开放阅读框,编码361个氨基酸,还含有一段21个氨基酸的信号肽序列;核苷酸序列与GenBank上登录的SLA-3参考序列的同源性为93.1%;与牛、绵羊、山羊的同源性较高,而与鸡的同源性最低.蛋白分子结构预测表明,猪SLA-3基因编码的蛋白分子是由胞外区(303个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(35个氨基酸)组成的一种跨膜蛋白.     

迟熟蕉柑茎尖嫁接砧木对比试验及病毒类病害鉴定

分别以枳和阿尔及利亚夏橙作为砧木,以迟熟蕉柑芽作为接穗进行茎尖嫁接,结果枳砧嫁接成活率为9．1％,阿尔及利亚夏橙砧嫁接成活率为54．5％,将两种砧木嫁接苗再嫁接在枳砧上,其3年生幼树均生长正常,表明阿尔及利亚夏橙是茎尖嫁接迟熟蕉柑的优良砧木。应用指示植物鉴定方法和PER检测技术鉴定7株茎尖嫁接苗的柑橘碎叶病、衰退病、裂皮病和黄龙病,结果1、3．4、5、6号迟熟蕉柑单株不带碎叶病、衰退病、裂皮病和黄龙病,可作为繁殖无病苗木的备选材料;2、7号迟熟蕉柑单株不带碎叶病、裂皮病和黄龙病,但带有衰退病,推测衰退病毒源可能来自取芽的田间植株。     

应用套式RT—PCR检测广西临床病料猪流感病毒

套式RT-PCR技术是在常规RT-PCR的基础上设计1对内套引物,对常规RT-PCR的产物再进行一次PCR扩增,该技术比常规RT-PCR技术的检测敏感度更高,更适于检测病原RNA含量极其少的临床病料。通过应用套式RT-PCR方法对来自广西7个市不同猪场的疑似猪流感的临床病料进行猪流感病毒检测,结果发现,被检的7个市均检出猪流感病毒,72份病料中31份为阳性,阳性率为43．06％,可见广西有呼吸道症状的病猪中有较高猪流感病毒感染率,必须重视和加强广西猪流感的监测与防控工作。     

广西猪伪狂犬病的流行监测及防控工作重点

为调查猪伪狂犬病（PR）目前在广西的流行情况,于2006～2008年对广西13个市122个不同规模猪场进行流行病学调查,并对163份病料及61份血清进行检测。结果显示,163份病料经PCR检测出阳性病料6份,阳性率为3．7％;对6株广西PRV gE胞外基因进行克隆测序比较及遗传进化分析发现,广西PRV毒株变异不大,6株广西PRVgE基因与国内外其他毒株之间核苷酸序列同源性均很高,介于96．4％～100．0％之间,氨基酸同源性为93．6％～100．0％,亲缘关系较为密切,应为同一毒株遗传进化而来;61份血清经gE—ELISA检测出阳性血清7份,阳性率11．5％,表明部分猪场存在PRV隐眭感染。调查结果肯定了广西在PR防控工作中取得的成绩,提出做好免疫、加强监测、淘汰隐性感染猪、提高猪体免疫力、净化种猪群是今后PR防控工作的重点。     

茉莉酸甲酯对烟草抗黄瓜花叶病毒的诱导效应

用1 g.L-1茉莉酸甲酯(MJ)处理小十字期烟草幼苗,烟苗移栽后长至10片真叶时再用相同浓度MJ处理一次,并接种烟草黄瓜花叶病毒,研究茉莉酸甲酯对烟草黄瓜花叶病毒(CMV)的诱导效应.结果表明:接种CMV后21 d,MJ处理烟株的病情显著低于对照,诱导效果达到43.24%;MJ处理提高了烟草幼苗叶片内的过氧化物酶、过氧化氢酶及超氧化物歧化酶的活性和过氧化氢的含量;而接种CMV后,MJ处理烟株叶片过氧化氢酶、超氧化物歧化酶活性下降,过氧化物酶活性增强,过氧化氢含量明显升高.     

表达狂犬病毒糖蛋白和核蛋白的重组腺病毒的生物学特性及免疫研究

对狂犬病毒G+N双基因复制缺陷型腺病毒穿梭载体进行转染,以获得融合表过狂犬病毒糖蛋白和核蛋白重组腺病毒,并对其进行生物学特性和免疫学研究.结果表明:将含有狂犬病毒G+N的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/G+N与腺病毒骨架载体pAdEasy-1在大肠杆菌细胞内同源重组,可获得带有目的基因的重组腺病毒载体pAd/G+N,经PacI酶切后转染HEK-293细胞,可获得带有目的基因的重组腺病毒.重组腺病毒在HEK-293细胞中连续传代15代次后,在细胞内的病变时间缩短为20 h以内.经测定,重组腺病毒对HEK-293细胞的TCID50为10-8.0.mL-1,用RT-PCR法可检测到狂犬病毒糖蛋白和核蛋白基因片段;重组腺病毒经口服免疫小白鼠,对狂犬病毒CVS毒株的免疫保护率可达80%.     

GA3提高毛竹种子活力的机理探索

用不同浓度的GA3处理在4℃下贮藏2年的毛竹种子,以探索提高毛竹种子活力的机理。结果表明：试验条件下不同浓度的GA3处理均能提高毛竹种子活力,以100mg／L处理效果最佳;处理后的种子浸出液相对电导率下降,吸胀种子的可溶性糖含量增加,SOD,POD,CAT活性增强,MDA含量下降,且这些指标与种子活力呈显著相关性。     

脱毒百合种球生产关键技术研究

介绍了脱毒百合原种的要求、脱毒种球的生产和预防病毒病发生传播的措施等脱毒百合种球生产关键技术。     

正链RNA病毒感染性克隆的构建策略及影响因素

利用全长cDNA构建感染性克隆是拯救RNA病毒的基础和关键,也是反向遗传技术的核心。文章综述了构建正链RNA病毒感染性克隆的基本思路和关键技术,总结了影响克隆感染性的因素,并对感染性克隆技术的应用做一简述。